Klinik örneklerde mycobacterium tuberculosis saptanmasında PCR-ELISA yönteminin değerlendirilmesi

Abstract

Amaç: Tüberküloz (TB) dünyada en önemli ölüm nedenlerinden biridir. Mycobacterium tuberculosis komplex’in (MTBC) neden olduğu hastalığın erken tanısı TB’un kontrolünde önemlidir. Bu amaçla son yıllarda TB’un hızlı tanı- sında nükleik asit amplifikasyon test (NAAT) yöntemleri yaygın olarak kullanılmaya başlamıştır. Klinik hasta örne- ğinden direkt olarak MTBC saptamaya yönelik NAAT yöntemlerinden biri de “Polymerase Chain Reaction-Enzyme Immunoassay” (PCR-ELISA)’dır. Bu çalışmada, PCR-ELISA temelli ticari bir test olan ProDect MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS (bcs Biotect S.p.A., Cagliari, İtalya) testinin akciğer ve akciğer dışı örneklerde MTBC saptamadaki performansının araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışmada tüberküloz kuşkulu hastalardan alınan 100 klinik örnek (76 akciğer, 24 akciğer dışı örnek) mikroskopi, kültür ve ProDect MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS PCR-ELISA test yöntemi ile incelenmiştir. Bu testte, amplifiye ürünün saptanması “DNA enzyme immunoassay” (DNA-ELISA) yöntemi ile mikroplaklarda ger- çekleştirilir. DNA-ELISA yöntemi mikroplak kuyucuklarına kaplanmış, streptavidin-biotin bağlı, tek iplikçikli prob DNA ile amplifiye edilmiş DNA’ların hibridizasyonu esasına dayanır. Aranan DNA ile prob arasındaki bağlanma anti-DNA fare monoklonal antikor kullanılarak saptanır. Bulgular: Altın standart yöntem olan kültür ile birlikte değerlendirildiğinde, tüm örneklerden elde edilen sonuçlara göre PCR-ELISA testinin duyarlılığı % 68.2, özgüllüğü % 94.1 olarak belirlenmiştir. Akciğer örneklerinde duyarlılık ve özgüllük sırası ile % 71.1 ve % 93.5, akciğer dışı örneklerde ise % 61.9 ve % 100 olarak saptanmıştır. Yayma pozitif akciğer örneklerinde ise testin duyarlılığı % 83.3 ve özgüllüğü % 100 olarak bulunmuştur. Sonuç: Tüberkülozun hızlı tanısında PCR-ELISA yönteminin kısmen çok fazla ekipman gerektirmeyen bir yöntem olması nedeni ile, özellikle yayma pozitif akciğer örnekleri için, mikobakteriyoloji laboratuvarlarında tüberküloz tanısında rutin bir NAAT olarak değerlendirilebileceği sonucuna varılmıştır.

Tuberculosis (TB) is one of the major causes of death worldwide. In the controlling of Tuberculosis (TB), early diagnosis of disease caused by Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) is vital. Hence, nucleic acid amplification tests (NAAT) for rapid diagnosis of TB came to be used widely in recent years. PCR-ELISA is a method which based on nucleic acid amplification based methods that are used for the direct detection of MTBC in clinical samples. The aim of study, was to evaluate the performance of ProDect MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS (bcs Biotect S.p.A., Cagliari, Italia), a commercial test based on PCR-ELISA for the detection of MTBC in pulmonary and extrapulmonary clinical samples. Material and Methods: 100 clinical samples (76 pulmonary and 24 extrapulmonary) from patients suspected of TB were tested by microscopy, culture and ProDect MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS PCR-ELISA methods. In this test, detection of the amplified product is performed on microplates using DNA enzyme immunoassay. The DNA enzyme immunoassay is based on the hybridization of amplified DNA with a single-stranded DNA probe, coated on the wall of the microtitre plate wells by a streptavidin-biotin bond. The hybrid between probe and DNA being examined is detected by using an anti-DNA mouse monoclonal antibody. Results: When PCR-ELISA test results were evaluated according to culture results which is taken as the gold standard, the sensitivity and, specificity were 68.2% and 94.1% , respectively, for whole specimens. The sensitivity, specificity were 77.1% , 93.5% for pulmonary specimens and 61.9% , 100% for extrapulmonary specimens, respectively. For smear positive pulmonary specimens, the sensitivity and specificity were found to be 83.3% and 100% , respectively. Conclusion: PCR-ELISA method can be utilized cost-effectively, providing results with the use of less equipment, as a routine nucleic amplification test for the rapid diagnosis of tuberculosis in a mycobacteriology laboratory, specifically for smear positive pulmonary samples.