Arabidopsis Clavata2 ve crabsclaw gen homologlarının thermopsis Turcica'dan klonlanması ve gen ifade analizleri

Abstract

Türkiye endemik türü Thermopsis turcica tek çiçekten çoklu serbest karpel üreten sıra dışı morfolojik özellik sahibi yabani baklagil türüdür. Önemli gen kaynağımız bu bitkinin ilginç özelliği kontrol eden faktörlerin belirlenmesi amacına yönelik olarak bu çalışma gerçekleştirilmiştir. ‘Bitkilerde çiçek meristem boyutunu kontrol eden ve karpel oluşumuna eşlik bu çalışmaya ait iki gende oluşabilecek mutasyonlar çiçek organ sayısı ve oluşma yerlerinde anormalliklere neden olabilir mi?’ sorusuna cevap aranmıştır. Thermopsis turcica genç tomurcuklarından Arabidopsis CLV2 ve CRC gen homologları izole edilmiş ve farklı dokularda ifadesel analizleri yapılmıştır. Öncelikle bitkiden izole edilen total RNA ile ilk iplik cDNA ifadeleri sentezlenmiş, dejenere primerler ile kısmi uzunluk cDNA’ları çoğaltılıp klonlama işlemi yapılmış ve dizi analizleri gerçekleştirilmiştir. İlgili genlerin tam uzunluk cDNA’ları RACE analizleri ile dizileme işlemi gerçekleştirilmiştir. Gerçek zamanlı PCR yöntemi ile de genin fonksiyonel analizleri tomurcuk, sepal, petal, stamen ve karpel dokularında genlerin göreceli ifade analizleri yapılmıştır. CLV2 geni için tam uzunluk cDNA dizisi 2557 bp, kodlanan protein 716 aminoasit, CRC geni için tam uzunluk cDNA dizisi 901 bp, kodlanan protein 174 aminoasit olarak tespit edilmiştir. Hizalama ve filogenetik analizler CLV2 ve CRC genlerinin diğer legüm türlerinde belirlenen homologlarına benzer olduğunu ispatlamıştır. Gerçek zamanlı (RT-qPCR) PCR ile genler için göreceli sonuçlar çalışma içerisinde mevcuttur. Bunlara ek olarak in situ hibridizasyon tekniği denenmiş olup bulgular verilmiştir.

Turkey endemic type Thermopsis turcica produces one flower pistils multiple free n unusual morphological property owner is a type of wild legumes. Important source of genes, the determination of the factors that control the interesting feature of this plant for the purposes of this study. ‘In plants flower meristem buyot accompanied the formation of that control and the pistils that mutations in two genes belonging to work that may occur in the number of flower organs and can cause abnormalities in the formation of? ' answer to the question. Thermopsis tour are the young bud n Arabidopsis CLV2 and CRC gene homologs isolated and expressive analysis in different tissues. First of all, with total RNA isolated from the first thread has degenerated primers synthesized cDNA expressions, with partial length cDNA cloning process made and the replicated set of analyses. The full length cDNA of genes related to RACE analysis was carried out with the sequencing process. Real time PCR method and gene functional analyses with buds, sepals, petal, stamen and relative expression analysis of genes in the tissue of pistils. Full length cDNA sequence for the gene CLV2 2557 bp, the encoded protein 716 amino acids, CRC 901 for full length cDNA sequence of the gene--bp, the encoded protein 174 has been identified as amino acids. Alignment and phylogenetic analyses CLV2 and CRC genes are similar to other types of legüm is homologous set. Real time (RT-qPCR) PCR results relative to study courses with genes. In addition to in situ hybridization technique is called the findings.