Spermatological and biochemical examination of New Zealand rabbit semen after thawing

Abstract

In the present study, the effects of caffeic acid on rabbit semen were investigated using the antioxidant substance trehalose as a positive control. In the experiment, 4 male rabbits and 1 female rabbit were used. Ejaculates were collected via the artificial vaginal method 2 times a week for 4 weeks. Pooled semen samples were divided into four groups and diluted as follows: basic diluent+6%DMSO+caffeic acid (25µM and 50µM), basic diluent+6%DMSO+trehalose (positive control) (50mM), and basic diluent+6%DMSO (Control). After dilution, the semen samples were aspirated into straws and allowed to equilibrate at +4°C for 1 h. The samples were frozen in liquid nitrogen vapor and stored in liquid nitrogen. The highest value of sperm motility was detected in the 50 mM trehalose group (46.25±1.25%), which was significantly different from that in the control group (35.63±1.99%) (p<0.05). The sperm membrane integrity (SYBR 14/PI) results were determined to be 47.11±0.96%, 49.05±0.85%, and 49.79±1.04% in the 25 µM caffeic acid, 50µM caffeic acid, and 50 mM trehalose groups, respectively, and a significant difference was found between the supplement groups and the control group (39.01±1.21%) (p<0.05). In terms of acrosome integrity (FITC-PNA), the highest value was reached in the trehalose 50 mM group (48.70±1.03%), and a significant difference was observed compared with that in the control group (41.48±0.80%). A significant difference was observed in the total antioxidant capacity and total oxidant level values between the 50 mM trehalose group and the control group (p<0.05). As a result, caffeic acid added to the extender when rabbit semen was frozen had a better protective effect at higher doses.Sunulan çalışmada antioksidan madde trehaloz pozitif kontrol olarak kullanılarak kafeik asitin tavşan sperması üzerine etkileri araştırıldı. Deneyde, 4 erkek ve 1 dişi tavşan kullanıldı. Ejakülatlar 4 hafta boyunca haftada 2 tekrar şeklinde suni vajen yöntemi ile alındı. Alınan spermalar pooling yapıldıktan sonra dört eşit gruba ayrılarak sulandırıldı: temel sulandırıcı +%6 DMSO+kafeik Asit (25µM ve 50µM), temel sulandırıcı+%6 DMSO+trehaloz (pozitif kontrol) (50mM) ve temel sulandırıcı+%6 DMSO (Kontrol) içeren sulandırıcılar ile seyreltildi. Sulandırma işlemin sonrasında sperma örnekleri payetlere çekilerek, +4°C de 1 saat ekilibrasyon uygulandı. Numuneler, sıvı azot buharında donduruldu ve sıvı azotta saklandı. Çözüm sonrası sperma motilite değerlerinde en yüksek değere trehaloz 50 mM grubunda (%46.25±1.25) ulaşıldı ve kontrol grubu ile (%35.63±1.99) istatistiksel fark belirlendi (p<0.05). Sperma membran bütünlüğü (SYBR 14/PI) sonuçları kafeik Asit 25 µM kafeik Asit 50 µM ve trehaloz 50 mM gruplarında sırasıyla %47.11±0.96; %49.05±0.85; %49.79±1.04 olarak belirlenmiş ve katkı grupları ile kontrol grubu (%39.01±1.21) arasında istatistiksel fark bulunmuştur (p<0.05). Akrozom bütünlüğü (FITC-PNA) sonuçlarında ise Trehaloz 50 mM %48.70±1.03 gurubunda en yüksel değere ulaşılmış ve kontrol grubu %41.48±0.80 ile istatistiksel fark görülmüştür. Total antioksidan kapasite ve total oksidan seviye değerlerinde, Trehalose 50 mM grubunda kontrol grubuna kıyasla anlamlı fark gözlendi (p<0.05). Sonuç olarak, tavşan sperması dondurulmasında sulandırıcıya eklenen kafeik asit in yüksek dozda daha iyi koruyucu etki gösterdiği belirlendi.