Lipopolisakkarit (LPS) ile indüklenen tavuk embriyo fibroblast hücre kültüründe serum amiloid a üretimi üzerine immun sistemin ve a vitamininin rollerinin moleküler teknikler ile araştırılması

Abstract

Kanatlılarda bacak hastalıkları çeşitli sağlık problemlerine sebep olarak, hayvan refahını olumsuz yönde etkilemektedir. Bu bacak hastalıklarından biri olan amiloid artropati, kahverengi yumurtacı tavukların bacak eklemlerinde amiloid A (AA) protein birikimi ve AA proteinin prekürsör maddesi olan serum amiloid A’nın (SAA) kalıcı amiloid fibrillerini oluşturması ile meydana gelen patolojik bir olgudur. Bu tez çalışmasının amacı tavuk embriyonik sinoviyal fibroblastların (TESF) farklı dozlarda lipopolisakkarit (LPS), interlökin-1β (IL-1β) ve A vitamini ile indüklenmesi sonucunda 24. ve 48. saatlerdeki SAA üretimini, kültür ortamında enzim bağlı immunosorbent testi (ELISA) ve gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) ile moleküler düzeyde değerlendirmektir. Çalışmada ilk kez, kahverengi yumurtacı tavuk embriyolarından izole edilen TESF’lerde primer kültür, pasajlama ve karakterizasyon gibi uygun bir hücre kültürü sistemi oluşturulmuş, izole edilen TESF’lerin karakterizasyonunda immunositokimya, hemakolor boyama ve karbon fagositoz testi uygulanmıştır. Elde edilen sonuçlara göre, A vitamini ile 48 saat boyunca indüklenen deney grubu haricindeki tüm gruplarda qPCR ile SAA mRNA ekspresyonunda istatistiki açıdan anlamlı bir artış gözlenirken, ELISA ile kültür ortamındaki SAA seviyesinde anlamlı bir artış saptanamamıştır. Elde edilen bulgular TESF’lerdeki SAA ekpresyonunun özellikle LPS konsantrasyonuna bağlı olduğunu, IL-1β ve A vitaminin SAA ekspresyonu üzerine tek başına etkilerinin daha az olduğunu göstermiştir. Ayrıca kahverengi yumurtacı tavuk embriyolarından elde edilen TESF’lerin, amiloid artropati için uygun bir çalışma modelini temsil ettiği gözlenmiştir.

Leg diseases in poultry cause various health problems and adversely affect animal welfare. Amyloid arthropathy, one of these leg diseases, is a pathological phenomenon that occurs when amyloid A (AA) protein accumulates in the leg joints of brown layer hens and serum amyloid A (SAA), the precursor of AA protein, forms permanent amyloid fibrils. The aim of this thesis study was to evaluate the production of precursor protein SAA at 24 and 48 hours by enzyme-linked immunosorbent test (ELISA) and real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) after the induction of chicken embryonic synovial fibroblasts (CESF) with different doses of lipopolysaccharide (LPS), interleukin-1β (IL-1β) and vitamin A. In the study, for the first time, a suitable cell culture system such as primary culture, passage and characterization of CESFs isolated from brown layer hen embryos was created, and immunocytochemistry, hemacolor staining and carbon phagocytosis test were used to characterize the isolated CESFs. According to the results, a statistically significant increase was observed in SAA mRNA expression with qPCR in all groups except the group induced with vitamin A for 48 hours, while no significant increase was found in the SAA level in the culture medium with ELISA. Our findings have shown that SAA expression in CESFs is particularly dependent on LPS concentration, with IL-1β and vitamin A having less effect on SAA expression. It has also been observed that CESFs from brown layer hen embryos represent a suitable study model for amyloid arthropathy.