Enterobacteriaceae İzolatlarında Ctx-M Tipi Genişlemiş Spektrumlu Β-Laktamaz (Gsbl) Enzim Pozitifliği ve Dağılımı

Abstract

Genişlemiş spektrumlu beta-laktamaz (GSBL) üreten Enterobacteriaceae ailesinin üyeleri, günümüzde en önemli nozokomiyal patojenler arasındadır. Betalaktam antibiyotikleri hidrolize ederek inaktif hale getiren beta-laktamaz enzimi üretimi, başta Enterobacteriaceae üyeleri olmak üzere birçok bakteri türünün en önemli direnç mekanizmalarından birisidir. Baskın CTX-M genotiplerinde görülen dağılım, coğrafyaya bağlı olarak değişiklik göstermektedir. Aralarında İngiltere ve Hindistan’ın da bulunduğu birçok ülkede CTX-M 15 çok yaygın görülmekte iken, Latin Amerika’da CTX-M 2, İspanya ve Uzakdoğu’da ise CTX-M 9 ve CTX-M 14 baskındır. Bu çalışmada; Afyon Kocatepe Üniversitesi, Tıp Fakültesi Ahmet Necdet Sezer Uygulama Araştırma Hastanesi’nde farklı kliniklerden laboratuara gönderilen nozokomiyal suşlar, laboratuvarda konvansiyonel yöntemlerle identifiye edilmiş, daha sonra otomatize sistemlerle (Phoenix®, Bekton Dickinson Diagnostics), MicroScan® (Dade Behring Inc.) doğrulanmış, GSBL üretimleri çift disk sinerji yöntemi ile araştırılmış ve antibiyogramları belirlenmiştir. İncelenen 100 GSBL pozitif suştan 65 tanesi CTX-M universal primerleri ile polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemiyle pozitif bulunmuştur. Bununla birlikte grup spesifik primerlerle yapılan PCR reaksiyonları sonucu 61 suş CTX-M 1 (61.0%), 1 suş CTX-M 9 (1%) ve 1 suş CTX-M 2 (1%) yönünden pozitif olarak saptanmıştır. PCR reaksiyonları ile 50/82 Escherichia coli (% 61,0), 12/14 Klebsiella pneumoniae (% 85,7), ve ½ Citrobacter freundii (% 50,0) izolatları CTX-M pozitif bulunurken, Morganella morganii ve Enterobacter cloacae izolatlarında pozitiflik gözlenmemiştir. Daha sonra amplikonlar CTX-M tiplerinin belirlenmesi için sekanslanmış ve gen bankası verileri ile karşılaştırılmıştır. Buna göre, CTX-M 1 pozitif suşlardan sırasıyla CTXM 15 (31 suş), CTX-M 28 (17 suş), CTX-M 3 (9 suş), CTX-M 22 (2 suş), CTX-M 33 (2 suş), CTX-M 42 (2 suş), homolojileri tespit edilmiştir. Sonuç olarak; Afyonkarahisar bölgesindeki nozokomiyal suşlardan en sık CTX-M 15, ikincil sıklıkta da nadiren gözlenen CTX-M 28 formunun varlığı belirlenmiş olup bu verilerin daha ileri çalışmalar ile desteklenmesi gerektiği kanısına varılmıştır.

Extended-spectrum beta-lactamase (ESBL)-producing members of the Enterobacteriaceae family are important nosocomial pathogens. CTX-M type extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) are now the most important cause of resistance to beta-lactam antibiotics in E. coli and are reported worldwide with increasing frequency. Dominant CTX-M genotype varies geographically. CTX-M 15 dominates in many countries including the UK and India whereas CTX-M 2 is the most common genotype in Latin America and CTX-M 9 and CTX-M -14 in Spain and the Far East. In this study; a total of 100 consecutive ESBL positive nosocomial isolates of Enterobacteriaceae collected from Afyon Kocatepe University Hospital were screened for production of ESBLs by double disk synergy test and determined the susceptibility to antibiotics. Then this results confirmed by Phoenix® (Bekton Dickinson Diagnostics) and MicroScan® (Dade Behring Inc.).Among 100 ESBL positive strains 65 were positive for CTX-M by PCR with universal primers. However whengroup specific primers were used 61 strains were positive for CTX-M 1 (61.0%), 1 strain was positive CTX-M 9 (1%) and 1 strain was positive for CTX-M 2 (1%). Polymerase chain reaction detected bla(CTX-M) in 50/82 (60,97%) Escherichia coli, 12/14 (85,71%) Klebsiella pneumoniae, and 1/2 (50,0 %) Citrobacter freundii isolates with the ESBL phenotype. But there was no positive isolate detected in Morganella morganii and Enterobacter cloacae. Amplicons were sequenced to determine the CTX-M types and sequences were compared to gene bank. Among CTX-M 1 positive strains sequence results showed higher homology to CTX-M 15 (31 strains), CTX-M 28 (17 strains), CTX-M 3 (9 strains), CTX-M 22 (2 strains), CTX-M 33 (2 strains), CTX-M 42 (2 strains). As a result; The most common CTX-M type was CTX-M 15, the second common CTX-M type was CTX-M 28 related among strains isolated in Afyonkarahisar Turkey. Further studies will be necessary to confirm our finding.